Amidaas (AMD)
Ensüümid:On makromolekulaarsed bioloogilised katalüsaatorid, enamik ensüüme on valgud
Amidaas:Katalüüsivad erinevate endogeensete ja võõraste alifaatsete ja aromaatsete amiidide hüdrolüüsi, kandes atsüülrühma vette, mille tulemusel tekivad vabad happed ja ammoniaak. Hüdroksaamhappeid ja teisi orgaanilisi happeid kasutatakse laialdaselt ravimitena, kuna need on kasvufaktorite, antibiootikumide ja kasvaja inhibiitorite koostisosad. Amidaase saab katalüsaatori stereoselektiivsuse järgi jagada R- ja S-tüüpi atsülaasideks.
Lisaks amiidide hüdrolüüsi katalüüsimisele võib amidaas katalüüsida ka atsüüliülekande reaktsioone kosubstraatide, näiteks hüdroksüülamiini, juuresolekul.
Erinevate allikatega amidaasidel on erinev substraadi spetsiifilisus, mõned neist suudavad hüdrolüüsida ainult aromaatseid amiide, mõned ainult alifaatseid amiide ja mõned α- või ω-aminoamiide. Enamikul amiinidel on hea katalüütiline aktiivsus ainult atsükliliste või lihtsate aromaatsete amiidide suhtes, kuid keeruliste aromaatsete ühendite puhul on heterotsüklilised amiidid, eriti orto-asendustega amiidid, üldiselt madala aktiivsusega (ainult vähestel ensüümidel on parem katalüütiline toime).
Katalüütiline mehhanism:
| Ensüümid | Tootekood | Tootekood |
| Ensüümipulber | ES-AMD-101~ ES-AMD-119 | 19 amidaasi komplekt, igaüks 50 mg 19 eset * 50 mg/ese või muu kogus |
| Sõelumiskomplekt (SynKit) | ES-AMD-1900 | 19 amidaasi komplekt, igaüks 1 mg 19 eset * 1mg / ese |
★ Kõrge substraadi spetsiifilisus.
★ Tugev kiraalne selektiivsus.
★ Kõrge konversioonitõhusus.
★ Vähem kõrvalsaadusi.
★ Kerged reaktsioonitingimused.
★ Keskkonnasõbralik.
➢ Ensüümide skriiningut tuleks läbi viia spetsiifiliste substraatide puhul substraadi spetsiifilisuse tõttu ja leida ensüüm, mis katalüüsib sihtsubstraati parima katalüütilise efektiga.
➢ Ärge kunagi puutuge kokku äärmuslike tingimustega, näiteks kõrge temperatuuri, kõrge/madala pH ja suure kontsentratsiooniga orgaanilise lahustiga.
➢ Tavaliselt peaks reaktsioonisüsteem sisaldama substraati ja puhverlahust (ensüümi optimaalne reaktsiooni pH). Atsüülülekande reaktsioonisüsteemis peaksid olema kaasasubstraadid, näiteks hüdroksüülamiin.
➢ AMD tuleks reaktsioonisüsteemi lisada viimasena, optimaalse pH ja temperatuuriga.
➢ Kõikidel AMD vormidel on erinevad optimaalsed reaktsioonitingimused, seega tuleks igaüht neist eraldi uurida.
Näide 1(1):
Hüdrolüüsi aktiivsus erinevate amiidsubstraatide suhtes
| Aluspind | Konkreetne tegevus μmol min-1mg-1 | Aluspind | Konkreetne tegevus μmol min-1mg-1 |
| Atsetamiid | 3.8 | ο-OH bensamiid | 1.4 |
| Propioonamiid | 3.9 | p-OH bensamiid | 1.2 |
| Laktamiid | 12.8 | ο-NH2bensamiid | 1.0 |
| Butüüramiid | 11.9 | p-NH2bensamiid | 0,8 |
| Isobutüüramiid | 26.2 | ο-Toluamiid | 0,3 |
| Pentaanamiid | 22.0 | p-Toluamiid | 8.1 |
| Heksaanamiid | 6.4 | Nikotiinamiid | 1.7 |
| Tsükloheksaanamiid | 19,5 | Isonikotiinamiid | 1.8 |
| Akrüülamiid | 10.2 | Pikoliinamiid | 2.1 |
| Metakrüülamiid | 3.5 | 3-fenüülpropioonamiid | 7.6 |
| Prolinamiid | 3.4 | Indool-3-atseetamiid | 1.9 |
| Bensamiid | 6.8 |
Reaktsioon viidi läbi 50 mM naatriumfosfaatpuhverlahuses, pH 7,5, temperatuuril 70 °C.
| Amiidid | Hüdroksülamiin | Hüdrasiin |
| Atsetamiid | 8.4 | 1.4 |
| Propioonamiid | 18.4 | 3.0 |
| Isobutüüramiid | 25.0 | 22.7 |
| Bensamiid | 9.2 | 6.1 |
Reaktsioon viidi läbi 50 mM naatriumfosfaatpuhverlahuses, pH 7,5, temperatuuril 70 °C.
Seotud reagendi kontsentratsioon: amiidid, 100 mM (bensamiid, 10 mM); hüdroksüülamiin ja hüdrasiin, 400 mM; ensüüm 0,9 μM.
Näide 2(2):
Näide 3(3):
1. D'Abusco AS, Ammendola S. et al. Extremophiles, 2001, 5:183-192.
2. Guo FM, Wu JP, Yang LR jt. Protsessi biokeemia, 2015, 50(8): 1400–1404.
3. Zheng RC, Jin JQ, Wu ZM jt. Bioorgaaniline keemia, 2017, saadaval veebis 7.
